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    SVEA C4液相色譜柱在使用前,請*行柱的性能測試
  • 發(fā)布日期:2022-12-26      瀏覽次數:1347
    •   SVEA C4液相色譜柱是一款適合于蛋白質(zhì)分離分析用的產(chǎn)品。它使用3微米粒徑的硅膠填料,優(yōu)化了孔徑,固定相配體的烷基鏈長(cháng)及表面鍵合密度,可實(shí)現高分辨率和高回收率的分析。使用短柱可以在高流速下實(shí)現快速分析。
       
        SVEA C4液相色譜柱在使用前,*行柱的性能測試,并將結果保存起來(lái),作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。
        在做柱性能測試時(shí)要按照出廠(chǎng)報告中的條件進(jìn)行,只有這樣,測得的結果才有可比性。但要注意柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。
        1、樣品的前處理:
       ?、傧仁褂昧鲃?dòng)相溶解樣品;
       ?、谑褂妙A處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì);
       ?、凼褂?.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。
       
        2、流動(dòng)相的配制:
        液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
       ?、倭鲃?dòng)相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì )沉淀在柱中;
       ?、诹鲃?dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應;
       ?、哿鲃?dòng)相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長(cháng)泵的使用壽命;
       ?、芰鲃?dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制;
       ?、萘鲃?dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導致實(shí)驗無(wú)法進(jìn)行;
       ?、拊诹鲃?dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
       
        3、流動(dòng)相流速的選擇:
        因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數,使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的SVEA C4液相色譜柱,要追求較佳柱效,使用較佳流速。對內徑為4.6mm的SVEA C4液相色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
        當選用較佳流速時(shí),分析時(shí)間可能延長(cháng)??刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強度的方法以縮短分析時(shí)間。
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